技术原理:
是利用菌落测定法使大肠杆菌表达抗体的筛选方法。构建抗体表达库、引入大肠杆菌、构建大肠杆菌库,将大肠杆菌播种在琼脂糖培养基上,形成菌落与抗原膜呈色挑选克隆所需抗体。
服务周期:

技术优势:
l 可获高亲和性抗体
l 时间短(3天)
l 可获得兔单克隆抗体
l 重组可大量生产
l 分泌型菌体易纯化
一步法克隆抗体制作流程:
工作步骤 | 时间 | |
1 | 免疫动物 | 2-9周 |
2 | 淋巴组织,脾脏切除 |
2-3周 |
3 | RNA提取,cDNA合成 | |
4 | 以cDNA为模板扩增VH、VL基因 | |
5 | 连接VH和VL基因,插入专用载体,构建scFV基因库 | |
6 | 将scFV基因导入大肠杆菌中 | |
7 | 在琼脂培养基上的三明治过滤器上播种和培养 |
3天 |
8 | 检测过滤器阳性克隆点 | |
9 | 挑取阳性克隆,培养阳性克隆 | |
10 | 测序评估,客户评估 |
1周 |
11 | 所选阳性克隆抗体基因序列分析 | |
12 | 抗体基因序列信息报告 |
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